本發(fā)明涉及腸道菌群遞送移植，具體涉及一種腸溶包衣腸菌微膠囊及其制備方法。
背景技術(shù)：
1、《腸道菌群移植供體篩選與管理中國專家共識(shí)(2022版)》中指出，腸道菌群移植(fmt)目前已被臨床醫(yī)學(xué)指南及共識(shí)推薦用于多種腸道疾病治療。微膠囊是一種老幼皆宜的口服劑型，具有顆粒小、易吞咽、絕大多數(shù)難聞氣味被掩蓋等諸多優(yōu)點(diǎn)，是未來腸道菌群移植(fmt)口服用藥的趨勢(shì)之一。
2、腸菌微膠囊經(jīng)口服后先經(jīng)過胃再進(jìn)入腸道，胃部極端ph(ph＜3.0)對(duì)于微膠囊的破壞力非常強(qiáng)導(dǎo)致大量腸菌過早釋放失活，無法滿足腸道釋放活菌量的需求。(尤特奇)是一種合成藥用輔料品牌，化學(xué)成分屬于藥用丙烯酸樹脂，是由甲基丙烯酸、甲基丙烯酸酯類單體按特定比例聚合而成的共聚物，主要作為胃溶、腸溶、緩控釋包衣材料使用，其中結(jié)/直腸溶型eudragit可以在ph≥6環(huán)境下溶解，作為腸菌包衣時(shí)能夠避免胃酸侵蝕，待其進(jìn)入腸道ph≥6的微環(huán)境后溶解釋放腸菌，進(jìn)而達(dá)到靶向遞送目的。
3、結(jié)/直腸溶型eudragit在制備包衣時(shí)，需以醇類作為溶劑以形成均勻的高分子溶液，便于噴霧包衣時(shí)形成連續(xù)、致密的薄膜層。醇類溶劑對(duì)腸菌并不友好，采用醇溶結(jié)/直腸溶型eudragit制備包衣時(shí)會(huì)顯著降低腸菌微生物活力，進(jìn)而影響藥效。
4、如何使口服腸菌菌劑在生產(chǎn)、存儲(chǔ)和口服經(jīng)過漫長(zhǎng)的消化道進(jìn)入靶向腸道部位仍然能保持生物活性，是目前腸道菌群移植亟待解決的問題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本發(fā)明的目的是提供一種腸溶包衣腸菌微膠囊，該微膠囊腸溶活菌保持?jǐn)?shù)量高，能有效提升微膠囊產(chǎn)品在腸道部位的作用效果。
2、本發(fā)明技術(shù)方案詳述如下：
3、一種腸溶包衣腸菌微膠囊，由內(nèi)至外依次由囊芯、隔離層包衣和腸溶層包衣構(gòu)成，其中，
4、囊芯含有腸菌菌泥；
5、隔離層由非離子型纖維素混合醚、滑石粉、納米二氧化鈦、三醋酸甘油酯和水制成隔離層包衣液包裹在囊芯外表面；
6、腸溶層由結(jié)/直腸溶型eudragit、滑石粉、tec和醇類溶劑制成腸溶層包衣液包裹在隔離層外表面。醇類溶劑優(yōu)選使用體積百分濃度95％的乙醇水溶液。
7、所述非離子型纖維素混合醚包括hpmc(羥丙基甲基纖維素)、hemc(羥乙基甲基纖維素)、hbmc(羥丁基甲基纖維素)、emc(乙基甲基纖維素)、cmmc(羧甲基甲基纖維素)等。
8、可選或優(yōu)選的，上述微膠囊中，所述非離子型纖維素混合醚優(yōu)選為hpmc，其同時(shí)含有甲氧基和羥丙基取代基，親水基團(tuán)使其冷水下即可形成膠體溶液，疏水基團(tuán)使得溶劑揮發(fā)后分子鏈間氫鍵和疏水作用增強(qiáng)，導(dǎo)致鏈段交聯(lián)，形成三維網(wǎng)狀凝膠結(jié)構(gòu)。
9、可選或優(yōu)選的，上述微膠囊中，所述結(jié)/直腸溶型eudragit為eudragit?l100-55、eudragit?l100或eudragit?s100。
10、所述醇類溶劑優(yōu)選體積百分濃度為95％的乙醇水溶液，極性適中(無水乙醇過于疏水)，既能溶解疏水性聚合物，又能通過氫鍵與水形成微環(huán)境，增強(qiáng)溶解能力。較低的表面張力可減少顆粒聚集，提高滑石粉的分散穩(wěn)定性，同時(shí)其作為eudragit和tec的共同溶劑，還可促進(jìn)tec與eudragit的分子間結(jié)合，改善成膜柔韌性。
11、可選或優(yōu)選的，上述微膠囊中，按質(zhì)量百分比計(jì)，隔離層包衣液各組分用量為：
12、
13、可選或優(yōu)選的，上述微膠囊中，按質(zhì)量百分比計(jì)，腸溶層包衣液各組分用量為：
14、
15、本發(fā)明還提供了以上任一所述腸溶包衣腸菌微膠囊的制備方法，包括以下步驟：
16、(1)制備腸菌菌泥：新鮮糞便浸泡于生理鹽水獲得原始菌液，原始菌液經(jīng)45～60目濾網(wǎng)過濾后離心棄上清，獲得腸菌菌泥；
17、(2)制備囊芯：腸菌菌泥與適配壁材基質(zhì)混合制成微球并冷凍干燥，作為囊芯；
18、(3)隔離層包衣：將囊芯和隔離層包衣液送入流化床進(jìn)行包衣，獲得單層包衣微膠囊；
19、(4)腸溶層包衣：將一層包衣微膠囊和腸溶層包衣液送入流化床進(jìn)行包衣，獲得雙層包衣的腸溶包衣腸菌微膠囊。
20、可選或優(yōu)選的，上述方法中，步驟(3)和(4)中流化床進(jìn)風(fēng)溫度33～37℃，出風(fēng)溫度28～32℃，噴霧壓力1bar，噴霧速率3ml/min，霧化空氣流速15l/min。
21、可選或優(yōu)選的，上述方法中，步驟(4)腸溶層包衣液制備方法如下：
22、將結(jié)/直腸溶型eudragit置入部分醇類溶劑中攪拌至完全溶解得eudragit溶液，將滑石粉和tec置入剩余部分醇類溶劑中攪拌制成輔料混懸液，再將eudragit溶液和輔料混懸液混合攪拌，獲得腸溶層包衣液。
23、可選或優(yōu)選的，上述方法中，輔料混懸液還經(jīng)孔徑為0.5毫米的篩網(wǎng)過濾。
24、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：
25、1、本技術(shù)囊芯可通過現(xiàn)有的任何常規(guī)方法制備，優(yōu)選以凍干微球的形式制備，讓微膠囊即能夠保證腸菌的活性，又可以使腸菌處于低代謝水平，還能夠便于流化床包衣，提高包衣效果。
26、2、本技術(shù)通過隔離層進(jìn)行氧氣、光照及刺激性化學(xué)試劑隔離，保護(hù)腸菌活性
27、腸菌是定植在人體腸道中的微生物，它們?cè)谀c道中以共生的方式與人體相互依存，發(fā)揮著重要的生理功能。單品種腸菌、多品種混合腸菌以及腸菌菌群分別用于改善不同腸道問題，其中，單品種腸菌、多品種混合腸菌都可通過單獨(dú)培養(yǎng)菌種來獲得，腸菌菌群只能從健康人糞便中提取。腸菌菌群復(fù)雜多樣，主要包含厚壁菌門、擬桿菌門、放線菌門、變形菌門、疣微菌門以及其他類菌等等，厭氧菌的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過需氧菌和兼性厭氧菌。研究發(fā)現(xiàn)，以往腸菌微膠囊腸道活菌數(shù)量低的原因除了胃酸破壞外，制備和存儲(chǔ)過程中氧氣也會(huì)對(duì)這些厭氧和兼性厭氧菌造成氧化損傷、酶活性抑制等方面的損害，導(dǎo)致口服時(shí)囊芯活菌已大量死亡。腸菌菌群相較于其他可培養(yǎng)的單一菌種更為脆弱，相互之間存在互利、競(jìng)爭(zhēng)、代謝協(xié)作等關(guān)聯(lián)，維持這一平衡才能使其在腸道內(nèi)發(fā)揮正常作用。除了氧氣外，光照也會(huì)引發(fā)菌群光化學(xué)反應(yīng)損傷、影響酶活性、破壞細(xì)胞代謝平衡等諸多問題，影響腸菌菌群的正常生理功能，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致腸菌死亡。本技術(shù)利用特定比例的非離子型纖維素混合醚、滑石粉、納米二氧化鈦、三醋酸甘油酯制成的隔離層，可在囊芯表面形成一層致密遮光的保護(hù)層，共同阻隔外界氧氣和光照及刺激性化學(xué)環(huán)境(如化學(xué)試劑醇類、口服后胃酸環(huán)境)等的影響，為囊芯腸菌菌群營(yíng)造一個(gè)隔絕氧氣的舒適環(huán)境，以保持活菌數(shù)量。同時(shí)該隔離層在進(jìn)入腸道環(huán)境后可快速溶解，不會(huì)影響進(jìn)入腸道后的腸菌釋放。
28、3、本技術(shù)腸溶層采用結(jié)/直腸溶型eudragit(eudragit?l100-55、eudragit?l100或eudragit?s100)作為主要包衣成分，其在腸道ph環(huán)境下具有良好的溶解性。結(jié)/直腸溶型eudragit在包衣過程中需采用醇類作為溶劑，醇類中的羥基與其極性匹配可促進(jìn)其分子鏈?zhǔn)嬲?，提高溶解度，?yōu)選的95％乙醇能調(diào)節(jié)溶劑極性和降低溶液粘度，減少溶解過程中分子間過渡聚集或凝膠化。復(fù)配tec(檸檬酸三乙酯)后，可進(jìn)一步改善包衣膜的柔韌性，提高包衣效率。
29、醇類溶劑對(duì)于腸菌具有強(qiáng)烈的殺菌作用，隔離層在此時(shí)能夠有效阻斷含醇腸溶包一層液與囊芯的直接接觸，所以通過本技術(shù)特定成分的隔離層和腸溶層結(jié)合，以便能同時(shí)滿足制備過程便利、產(chǎn)品耐儲(chǔ)存、口服后耐胃酸、腸道崩解迅速、活菌存活率高等諸多需求。
30、4、隔離層和腸溶層包衣均使微膠囊表面成為近似球形，彌補(bǔ)了凍干過程失水導(dǎo)致的形狀改變，又賦予了微膠囊腸溶型釋放的能力。