本發(fā)明涉及桑黃液體發(fā)酵相關(guān)，具體為測(cè)定不同濃度油酸和發(fā)酵時(shí)間對(duì)桑黃液體發(fā)酵影響的方法。
背景技術(shù)：
1、桑黃作為藥食真菌，蘊(yùn)含各種多糖類、黃酮類、酚類和萜類等有效生物活性成分，具有抗氧化和抗衰老作用、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)、抗炎和抗傷害、抗糖尿病和保肝等諸多藥效，因此，桑黃在臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有重要藥用價(jià)值。然而，由于我國(guó)野生桑黃資源較為稀缺，加上市場(chǎng)需求不斷增加，桑黃供不應(yīng)求的局面愈發(fā)凸顯。另一方面，我國(guó)人工栽培桑黃技術(shù)尚處于初級(jí)階段，仍未能充分滿足市場(chǎng)需求，因此，開發(fā)桑黃大規(guī)模人工增殖技術(shù)有重要意義。
2、液體發(fā)酵技術(shù)是指在水溶液中混合微生物生長(zhǎng)所需的氮源、無機(jī)鹽和糖類等必需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)配制液體培養(yǎng)基，接菌后選擇適宜的培養(yǎng)環(huán)境和發(fā)酵參數(shù)，培養(yǎng)大量菌絲的發(fā)酵工藝。目前，關(guān)于添加外源因子促進(jìn)桑黃生長(zhǎng)繁殖的研究報(bào)道較少，因此，本研究在桑黃液體發(fā)酵培養(yǎng)基中添加油酸，分析不同濃度油酸對(duì)桑黃液體發(fā)酵過程的影響，為促進(jìn)桑黃產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展提供理論指導(dǎo)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本發(fā)明的目的在于提供測(cè)定不同濃度油酸和發(fā)酵時(shí)間對(duì)桑黃液體發(fā)酵影響的方法，以解決上述背景技術(shù)中提出關(guān)于添加外源因子促進(jìn)桑黃生長(zhǎng)繁殖的研究報(bào)道較少，導(dǎo)致不清楚油酸對(duì)桑黃液體發(fā)酵過程影響的問題。
2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：測(cè)定不同濃度油酸和發(fā)酵時(shí)間對(duì)桑黃液體發(fā)酵影響的方法，包括以下步驟；
3、s1、準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料、試劑與藥品；
4、s2、研究方法：
5、s2-1、菌種活化和菌種液制備；
6、s2-2、不同濃度油酸下桑黃菌絲體液體發(fā)酵；
7、s2-3、菌絲體生物量測(cè)定；
8、s2-4、發(fā)酵液ph值和酸度的測(cè)定；
9、s2-5、桑黃菌絲體提取液的制備；
10、s2-6、桑黃菌絲體抗氧化活性的測(cè)定；
11、s3、數(shù)據(jù)分析處理；
12、s4、結(jié)果與分析。
13、進(jìn)一步的，所述s2-1中菌種活化和菌種液制備，菌種活化：將貯藏的斜面菌種4塊(1塊約0.25cm2)轉(zhuǎn)接到新配制的pda培養(yǎng)基中，在28℃條件下培養(yǎng)，直至菌絲長(zhǎng)滿pda培養(yǎng)基，菌種液制備：在裝有150ml菌種培養(yǎng)基中，接入4塊約0.25cm2活化菌體，在28℃條件下，使用恒溫?fù)u床培養(yǎng)箱160r/min培養(yǎng)6d。
14、進(jìn)一步的，所述s2-2中，不同濃度油酸下桑黃菌絲體液體發(fā)酵。以油酸作為外源添加物，設(shè)置5個(gè)濃度梯度的實(shí)驗(yàn)組，分別為0.8ml/l、1.6ml/l、2.4ml/l、3.2ml/l和4.0ml/l，空白對(duì)照組不添加油酸，每組均設(shè)計(jì)3個(gè)生物學(xué)重復(fù)，發(fā)酵培養(yǎng)12天后測(cè)定各項(xiàng)數(shù)據(jù)。
15、進(jìn)一步的，所述s2-3中，菌絲體生物量測(cè)定，發(fā)酵后去除游離水分并收集培養(yǎng)物稱重。
16、進(jìn)一步的，所述s2-4中包括發(fā)酵液ph值和酸度的測(cè)定，對(duì)發(fā)酵后桑黃菌絲體液體進(jìn)行過濾并測(cè)定ph值和酸度測(cè)定。
17、進(jìn)一步的，所述s2-5中桑黃菌絲體提取液的制備，稱量菌絲體質(zhì)量并按比例加入蒸餾水，水浴提取并對(duì)提取液進(jìn)行過濾，濾液離心處理后取上清液。
18、進(jìn)一步的，所述s2-6中桑黃菌絲體抗氧化活性的測(cè)定包括dpph清除率測(cè)定和還原能力的測(cè)定，得到反應(yīng)溶液并測(cè)定混合體系吸光度。
19、進(jìn)一步的，所述s4中結(jié)果與分析包括不同濃度油酸對(duì)桑黃液體發(fā)酵的影響和不同發(fā)酵時(shí)間對(duì)桑黃菌絲體產(chǎn)量和品質(zhì)的影響，不同濃度油酸對(duì)桑黃液體發(fā)酵的影響中包括不同濃度油酸對(duì)桑黃菌絲體發(fā)酵液ph和酸度值的影響、不同油酸濃度對(duì)桑黃菌絲體產(chǎn)量的影響和不同濃度油酸對(duì)桑黃菌絲體抗氧化活性的影響；不同發(fā)酵時(shí)間對(duì)桑黃菌絲體產(chǎn)量和品質(zhì)的影響包括不同發(fā)酵時(shí)間發(fā)酵液ph值與酸度的變化、不同發(fā)酵時(shí)間桑黃菌絲體的鮮重和不同發(fā)酵時(shí)間桑黃菌絲體抗氧化活性的變化。
20、進(jìn)一步的，所述不同濃度油酸對(duì)桑黃菌絲體抗氧化活性的影響包括dpph自由基清除能力和不同濃度油酸對(duì)桑黃菌絲體還原能力分析，所述不同發(fā)酵時(shí)間桑黃菌絲體抗氧化活性的變化包括dpph自由基清除能力和不同發(fā)酵時(shí)間桑黃菌絲體還原能力。
21、跟現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：
22、1.當(dāng)在適宜的發(fā)酵條件時(shí)，有利于桑黃生長(zhǎng)繁殖，使其積累更多的活性物質(zhì)，但不適宜的條件可能會(huì)抑制其生長(zhǎng)繁殖或改變菌絲體的代謝過程。
23、進(jìn)一步的，本實(shí)驗(yàn)明確了油酸對(duì)桑黃菌絲體生長(zhǎng)和抗氧化活性產(chǎn)生積極和抑制作用的濃度區(qū)間，為促進(jìn)桑黃產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展提供理論指導(dǎo)。
24、2.通過不同油酸濃度對(duì)桑黃菌絲體生長(zhǎng)和有效成分物質(zhì)合成均存在影響；適度的油酸能夠有效維持桑黃生長(zhǎng)環(huán)境的酸堿平衡，從而為其菌絲體的生長(zhǎng)和代謝提供適宜的條件。
25、進(jìn)一步的，在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加適度的油酸可以有效提高桑黃菌絲體的生物量和抗氧化活性；此外，油酸濃度與菌絲體產(chǎn)量和抗氧化活性為非線性關(guān)系。
1.測(cè)定不同濃度油酸和發(fā)酵時(shí)間對(duì)桑黃液體發(fā)酵影響的方法，其特征在于：包括以下步驟；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定不同濃度油酸和發(fā)酵時(shí)間對(duì)桑黃液體發(fā)酵影響的方法，其特征在于：所述s2-1中菌種活化和菌種液制備，菌種活化：將貯藏的斜面菌種4塊(1塊約0.25cm2)轉(zhuǎn)接到新配制的pda培養(yǎng)基中，在28℃條件下培養(yǎng)，直至菌絲長(zhǎng)滿pda培養(yǎng)基，菌種液制備：在裝有150ml菌種培養(yǎng)基中，接入4塊約0.25cm2活化菌體，在28℃條件下，使用恒溫?fù)u床培養(yǎng)箱160r/min培養(yǎng)6d。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的測(cè)定不同濃度油酸和發(fā)酵時(shí)間對(duì)桑黃液體發(fā)酵影響的方法，其特征在于：所述s2-2中，不同濃度油酸下桑黃菌絲體液體發(fā)酵。以油酸作為外源添加物，設(shè)置5個(gè)濃度梯度的實(shí)驗(yàn)組，分別為0.8ml/l、1.6ml/l、2.4ml/l、3.2ml/l和4.0ml/l，空白對(duì)照組不添加油酸，每組均設(shè)計(jì)3個(gè)生物學(xué)重復(fù)，發(fā)酵培養(yǎng)12天后測(cè)定各項(xiàng)數(shù)據(jù)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的測(cè)定不同濃度油酸和發(fā)酵時(shí)間對(duì)桑黃液體發(fā)酵影響的方法，其特征在于：所述s2-3中，菌絲體生物量測(cè)定，發(fā)酵后去除游離水分并收集培養(yǎng)物稱重。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的測(cè)定不同濃度油酸和發(fā)酵時(shí)間對(duì)桑黃液體發(fā)酵影響的方法，其特征在于：所述s2-4中包括發(fā)酵液ph值和酸度的測(cè)定，對(duì)發(fā)酵后桑黃菌絲體液體進(jìn)行過濾并測(cè)定ph值和酸度測(cè)定。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的測(cè)定不同濃度油酸和發(fā)酵時(shí)間對(duì)桑黃液體發(fā)酵影響的方法，其特征在于：所述s2-5中桑黃菌絲體提取液的制備，稱量菌絲體質(zhì)量并按比例加入蒸餾水，水浴提取并對(duì)提取液進(jìn)行過濾，濾液離心處理后取上清液。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的測(cè)定不同濃度油酸和發(fā)酵時(shí)間對(duì)桑黃液體發(fā)酵影響的方法，其特征在于：所述s2-6中桑黃菌絲體抗氧化活性的測(cè)定包括dpph清除率測(cè)定和還原能力的測(cè)定，得到反應(yīng)溶液并測(cè)定混合體系吸光度。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的測(cè)定不同濃度油酸和發(fā)酵時(shí)間對(duì)桑黃液體發(fā)酵影響的方法，其特征在于：所述s4中結(jié)果與分析包括不同濃度油酸對(duì)桑黃液體發(fā)酵的影響和不同發(fā)酵時(shí)間對(duì)桑黃菌絲體產(chǎn)量和品質(zhì)的影響，不同濃度油酸對(duì)桑黃液體發(fā)酵的影響中包括不同濃度油酸對(duì)桑黃菌絲體發(fā)酵液ph和酸度值的影響、不同油酸濃度對(duì)桑黃菌絲體產(chǎn)量的影響和不同濃度油酸對(duì)桑黃菌絲體抗氧化活性的影響；不同發(fā)酵時(shí)間對(duì)桑黃菌絲體產(chǎn)量和品質(zhì)的影響包括不同發(fā)酵時(shí)間發(fā)酵液ph值與酸度的變化、不同發(fā)酵時(shí)間桑黃菌絲體的鮮重和不同發(fā)酵時(shí)間桑黃菌絲體抗氧化活性的變化。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的測(cè)定不同濃度油酸和發(fā)酵時(shí)間對(duì)桑黃液體發(fā)酵影響的方法，其特征在于：所述不同濃度油酸對(duì)桑黃菌絲體抗氧化活性的影響包括dpph自由基清除能力和不同濃度油酸對(duì)桑黃菌絲體還原能力分析，所述不同發(fā)酵時(shí)間桑黃菌絲體抗氧化活性的變化包括dpph自由基清除能力和不同發(fā)酵時(shí)間桑黃菌絲體還原能力。