本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)檢測領(lǐng)域，涉及宮頸高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變hsil相關(guān)的陰道菌群蛋白標(biāo)志物組及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1、宮頸癌是原發(fā)于子宮頸部位的惡性腫瘤，是最常見的婦科惡性腫瘤。女性陰道微生物群落在人類乳頭瘤病毒（human?papillomavirus，hpv）感染和宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中起關(guān)鍵作用。在正常生理狀態(tài)下，陰道菌群維持動(dòng)態(tài)平衡，形成健康的微環(huán)境，而持續(xù)的菌群紊亂會(huì)顯著增加hpv感染風(fēng)險(xiǎn)，并促進(jìn)宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變（squamous?intraepitheliallesion，sil）的發(fā)展。sil患者若病情進(jìn)展，通常經(jīng)歷從低級(jí)別sil（low-grade?sil，lsil）到高級(jí)別hsil的演變過程，最終可能發(fā)展為宮頸癌。
2、目前，關(guān)于陰道菌群在宮頸癌癌前病變中的作用研究主要集中于微生物群落結(jié)構(gòu)及物種豐度變化（j?transl?med,?2024,?22(1):396;?bmc?women's?health,?2025,?25(1):65），而對菌群功能活性（如蛋白質(zhì)表達(dá)譜）在lsil向hsil轉(zhuǎn)變過程中的調(diào)控機(jī)制仍缺乏深入認(rèn)知。由于不同級(jí)別sil的臨床管理策略及癌變風(fēng)險(xiǎn)存在顯著差異，探索陰道菌群蛋白質(zhì)組的動(dòng)態(tài)變化，對解析癌前病變進(jìn)展機(jī)制、開發(fā)新型診斷標(biāo)志物及發(fā)現(xiàn)潛在治療靶點(diǎn)具有重要價(jià)值。
3、傳統(tǒng)的微生物組學(xué)研究方法（如16s?rrna測序）難以直接反映菌群的功能活性，而陰道分泌物中蘊(yùn)含豐富的微生物蛋白信息，可更直接地揭示菌群與宿主的相互作用機(jī)制?；谝合嗌V-質(zhì)譜法的宏蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)能夠?qū)?fù)雜樣本中的蛋白質(zhì)進(jìn)行高精度定性定量分析，已經(jīng)被廣泛運(yùn)用于疾病機(jī)理研究和生物標(biāo)志物挖掘領(lǐng)域中。rafael?valdés-mas等人利用宏蛋白質(zhì)組學(xué)方法，對人體腸道微生物群落、宿主和飲食暴露進(jìn)行了綜合分析，發(fā)現(xiàn)了一些與炎癥性腸病相關(guān)的微生物蛋白質(zhì)，這些微生物蛋白質(zhì)可作為評估腸道微生物功能狀態(tài)的生物標(biāo)志物（cell,?2025,?188(4):1062-1083）。
4、基于此，本發(fā)明采用宏蛋白質(zhì)組學(xué)方法，首次構(gòu)建了一組可用于宮頸hsil診斷的陰道菌群蛋白標(biāo)志物。該標(biāo)志物組合不僅有助于早期識(shí)別宮頸hsil患者，優(yōu)化臨床干預(yù)策略，還為深入理解陰道菌群在宮頸癌前病變中的功能機(jī)制及開發(fā)新型微生態(tài)調(diào)節(jié)療法提供了重要依據(jù)。
5、公開于該背景技術(shù)部分的信息僅僅旨在增加對本發(fā)明的總體背景的理解，而不應(yīng)當(dāng)被視為承認(rèn)或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、針對現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明提供宮頸高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變hsil相關(guān)的陰道菌群蛋白標(biāo)志物組及其應(yīng)用。
2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取以下技術(shù)方案：
3、陰道菌群蛋白標(biāo)志物組作為生物標(biāo)志物在制備診斷宮頸hsil相關(guān)的產(chǎn)品中的應(yīng)用：
4、所述生物標(biāo)志物包括蛋白組合1、蛋白組合2、蛋白組合3或蛋白組合4中的一種或多種；
5、所述蛋白組合1選自普雷沃菌屬，包括蛋白i4zbf9、a0a134b2x0、a0a134bdm5、i4z7g8、i4zad6；
6、所述蛋白組合2選自乳酸桿菌屬，包括蛋白c2e762、a0a109den7、a0a120dka4；
7、所述蛋白組合3選自巨球形菌屬，包括蛋白a0a2j8bai4；
8、所述蛋白組合4選自念珠狀鏈桿菌屬，包括蛋白d1ayn8。
9、優(yōu)選的，所述產(chǎn)品包括試劑或試劑盒。
10、優(yōu)選的，所述生物標(biāo)志物中i4zbf9、c2e762、a0a134b2x0、a0a2j8bai4、a0a134bdm5、a0a120dka4、i4zad6在宮頸hsil患者中表達(dá)上調(diào)，而a0a109den7、d1ayn8、i4z7g8在宮頸hsil患者中表達(dá)下調(diào)。
11、采取上述技術(shù)方案，該標(biāo)志物組的建立填補(bǔ)了現(xiàn)有技術(shù)中缺乏功能性蛋白標(biāo)志物的空白，為宮頸癌前病變的精準(zhǔn)診斷提供了新的分子檢測靶標(biāo)。通過分析這些蛋白標(biāo)志物的表達(dá)特征，不僅能夠?qū)崿F(xiàn)對hsil患者的早期識(shí)別，指導(dǎo)臨床制定個(gè)體化干預(yù)方案，同時(shí)這些標(biāo)志物所反映的陰道微生態(tài)功能變化，為揭示菌群在宮頸病變發(fā)生發(fā)展中的分子調(diào)控機(jī)制提供了重要線索，也為靶向調(diào)節(jié)陰道微環(huán)境的治療策略開發(fā)奠定了理論基礎(chǔ)。這一發(fā)現(xiàn)將宮頸病變的診斷從傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)觀察提升至功能蛋白組學(xué)水平，具有重要的臨床轉(zhuǎn)化價(jià)值。
12、優(yōu)選的，所述宮頸hsil的診斷是通過液相色譜-質(zhì)譜法實(shí)現(xiàn)的。
13、采取上述技術(shù)方案，通過液相色譜-質(zhì)譜法檢測生物標(biāo)志物來診斷患者是否患有宮頸hsil，具有高靈敏度、高準(zhǔn)確度和強(qiáng)抗干擾的檢測特點(diǎn)。
14、陰道菌群蛋白標(biāo)志物組的篩選方法，包括如下步驟：
15、1）分別采集宮頸hsil患者和對照組的陰道菌群樣本并進(jìn)行預(yù)處理；采集陰道菌群樣本，離心后獲取沉淀，提取蛋白質(zhì)，酶解獲得肽段；
16、2）采用液相色譜-質(zhì)譜法對步驟1）中預(yù)處理后的陰道菌群樣本進(jìn)行檢測；
17、3）對步驟2）中檢測得到的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，篩選出所有與宮頸hsil相關(guān)的差異蛋白；
18、4）對步驟3）中篩選出的差異蛋白進(jìn)行機(jī)器學(xué)習(xí)特征權(quán)重分析，篩選出相對權(quán)重最大的前10個(gè)含有注釋信息的陰道菌群蛋白作為與宮頸hsil相關(guān)的陰道菌群蛋白標(biāo)志物組。
19、優(yōu)選的，在步驟1）中，所述陰道菌群樣本為陰道分泌物；所述對照組樣本源自宮頸lsil患者的陰道分泌物。
20、優(yōu)選的，在步驟2）中，所述的液相色譜-質(zhì)譜法具體為超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；所述的液相色譜采用反相色譜柱對蛋白質(zhì)酶解產(chǎn)生的肽段進(jìn)行分離檢測。
21、進(jìn)一步的，在步驟3）中，所述的數(shù)據(jù)處理方法包括①蛋白數(shù)據(jù)庫構(gòu)建與注釋；②蛋白數(shù)據(jù)庫檢索；③缺失值填充；④尋找差異陰道菌群蛋白。
22、更進(jìn)一步的，在步驟4）中，所述的機(jī)器學(xué)習(xí)特征權(quán)重分析以selectfrommodel?+random?forest（sfm?+?rf）作為分類模型，根據(jù)特征在留一交叉驗(yàn)證（leave-one-outcross?validation，loo-cv）中被保留的頻率和平均特征重要性（feature?importance）的乘積值確定蛋白標(biāo)志物組。
23、采取上述技術(shù)方案，更精準(zhǔn)有效的篩選方法能更準(zhǔn)確快速的篩選蛋白標(biāo)志物。
1.陰道菌群蛋白標(biāo)志物組作為生物標(biāo)志物在制備診斷宮頸hsil相關(guān)的產(chǎn)品中的應(yīng)用：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述生物標(biāo)志物中i4zbf9、c2e762、a0a134b2x0、a0a2j8bai4、a0a134bdm5、a0a120dka4、i4zad6在宮頸hsil患者中表達(dá)上調(diào)，而a0a109den7、d1ayn8、i4z7g8在宮頸hsil患者中表達(dá)下調(diào)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述宮頸hsil的診斷是通過液相色譜-質(zhì)譜法實(shí)現(xiàn)的。
4.陰道菌群蛋白標(biāo)志物組的篩選方法，其特征在于，包括如下步驟：
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述產(chǎn)品包括試劑或試劑盒。