本發(fā)明總體上涉及一種來(lái)自分舌蜂科蜜蜂hylaeus?nubilosus的多肽。本發(fā)明還涉及該多肽的重組生產(chǎn)、制備該多肽的方法，以及該多肽用于制備包含所需性質(zhì)的各種制品的用途。
背景技術(shù)：
1、合成聚合物(“塑料”的組分)是一組特別有用的材料。我們穿著、睡覺(jué)和創(chuàng)作的許多日常用品中都含有合成聚合物。在許多情況下，合成聚合物被用于制造各種材料，以賦予所需的性質(zhì)。此類性質(zhì)的實(shí)例包括賦予機(jī)械強(qiáng)度、耐熱性、芯吸性或者防水或抗?jié)衲芰Α?/p>
2、普遍使用合成聚合物的工業(yè)包括紡織品、生物醫(yī)學(xué)設(shè)備和化妝品。在一個(gè)實(shí)例中，大規(guī)模生產(chǎn)的合成服裝由各種聚合物組成，這些聚合物已經(jīng)被紡成合成纖維，包括聚酯、尼龍、乙烯樹(shù)脂和丙烯酸類樹(shù)脂。在一些情況下，這些合成纖維是疏水性的，對(duì)水或汗的吸收性較差，影響了它們的穿著舒適性。在其它情況下，纖維是親水性的，吸收性過(guò)強(qiáng)，這再次影響了耐磨性。
3、在其它實(shí)例中，合成聚合物可用于賦予紡織品或其它材料芯吸、吸濕或親水性質(zhì)。目前用于此類應(yīng)用的合成聚合物并不環(huán)保。例如，聚醚胺用于在尼龍服裝上形成親水涂層。遺憾的是，這些聚合物會(huì)隨時(shí)間降解，將對(duì)水生生物有毒的有害副產(chǎn)物釋放到環(huán)境中。
4、與紡織品整理加工用化學(xué)品相關(guān)的環(huán)境問(wèn)題已使各大制造企業(yè)的關(guān)注點(diǎn)轉(zhuǎn)向了環(huán)保的(生物基)化學(xué)品。綠色化學(xué)品是使用動(dòng)物和植物脂肪/油生產(chǎn)的，這使得它們與傳統(tǒng)對(duì)應(yīng)物相比是環(huán)保且有成本效益的。然而，油基產(chǎn)品的額外重量、重新應(yīng)用它們的需要，以及原材料可獲得性和價(jià)格的波動(dòng)都給市場(chǎng)參與者實(shí)現(xiàn)盈利和規(guī)模經(jīng)濟(jì)帶來(lái)了挑戰(zhàn)。
5、此類涂層的另一個(gè)重要用途是在醫(yī)療設(shè)備工業(yè)中。目前涂覆有吸濕性/親水性涂層的各種生物醫(yī)學(xué)設(shè)備的實(shí)例包括導(dǎo)管、植入物、管、晶狀體和一次性塑料載玻片。在許多實(shí)例中，這些涂層為涂覆后的生物醫(yī)學(xué)設(shè)備(特別是原位使用的那些)提供了優(yōu)異的生物相容性、親水性、疏水性和/或摩擦阻力，從而實(shí)現(xiàn)了有效的性能。
6、通常，這些涂層由聚氨酯、硅酮和聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯材料組成。
7、合成聚合物也用于生產(chǎn)化妝品/個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品，以賦予如潤(rùn)滑性和粘度等性質(zhì)。鄰苯二甲酸酯是一類稱為“無(wú)處不在的化學(xué)品”的化學(xué)品，其存在于如指甲油、香水、除臭劑、發(fā)膠、洗發(fā)水、肥皂、噴發(fā)劑和潤(rùn)膚露等產(chǎn)品中。鄰苯二甲酸酯已被鑒定為是擾亂人體內(nèi)分泌的化學(xué)品，其引起激素失衡，以及許多生殖健康和發(fā)育問(wèn)題。鄰苯二甲酸酯還在魚(yú)體內(nèi)生物累積，證明其對(duì)水生生態(tài)系統(tǒng)有毒，并且給人類帶來(lái)了危害。
8、公眾對(duì)與合成聚合物使用相關(guān)的環(huán)境問(wèn)題的意識(shí)日益提高導(dǎo)致在本工業(yè)領(lǐng)域中迫切需要提供無(wú)毒且環(huán)保的替代品。
9、本發(fā)明的目的是提供一種天然存在的多肽或其衍生物，該多肽或其衍生物可用作目前在上述各種工業(yè)中使用的至少一些合成聚合物的環(huán)保替代品，和/或提供一種制備這種多肽或其衍生物的方法，和/或至少為公眾提供一種有用的選擇。
10、在本說(shuō)明書(shū)中，引用了專利說(shuō)明書(shū)、其它外部文獻(xiàn)或其它信息源，這通常是為了提供用于討論本發(fā)明特征的背景。除非另外明確說(shuō)明，否則對(duì)此類外部文獻(xiàn)的引用不應(yīng)被解釋為承認(rèn)此類文獻(xiàn)或此類信息源在任何權(quán)利范圍內(nèi)是現(xiàn)有技術(shù)或形成本領(lǐng)域公知常識(shí)的一部分。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本文公開(kāi)了一種hylaeus?nubilosus多肽，也稱為“fun”多肽。還公開(kāi)了一種蛋白質(zhì)聚合物，其包含h.nubilosus“fun”多肽，或hylaeus?nubilosus多肽的至少一部分。在一些實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)聚合物包含準(zhǔn)重復(fù)結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，聚合物能夠組裝成纖維。還公開(kāi)了此類多肽和蛋白質(zhì)聚合物的組合物以及生產(chǎn)和使用所述多肽、蛋白質(zhì)聚合物和組合物的方法。
2、因此，在一方面，本發(fā)明涉及一種分離的多核苷酸，其編碼與seq?id?no：2具有至少70％氨基酸序列同一性的多肽。
3、在另一方面，本發(fā)明涉及一種分離的多核苷酸，其編碼包含seq?id?no：2的多肽。
4、在另一方面，本發(fā)明涉及一種分離的多肽，其與seq?id?no：2具有至少70％氨基酸序列同一性。
5、在另一方面，本發(fā)明涉及一種分離的多核苷酸，其編碼與sesavqssksssgmssqaqsqqqqx1qlqqsqaqsqeqesqsax2(seq?id?no：6)具有至少70％氨基酸序列同一性的多肽。
6、在另一方面，本發(fā)明涉及一種分離的多核苷酸，其編碼包含sesavqssksssgmssqaqsqqqqx1qlqqsqaqsqeqesqsax2(seq?id?no：6)的多肽。
7、在另一方面，本發(fā)明涉及一種分離的多肽，其與sesavqssksssgmssqaqsqqqqx1qlqqsqaqsqeqesqsax2(seq?id?no：6)具有至少70％氨基酸序列同一性。
8、在另一方面，本發(fā)明涉及一種載體，其編碼本文所述的分離的多肽。
9、在另一方面，本發(fā)明涉及一種載體，其包含本文所述的分離的多核苷酸。
10、在另一方面，本發(fā)明涉及一種分離的宿主細(xì)胞，其包含本文所述的分離的多肽、分離的多核苷酸和/或載體。
11、在另一方面，本發(fā)明涉及一種蛋白質(zhì)聚合物，其包含本文所述的fun多肽或其部分，其中蛋白質(zhì)聚合物包含至少一個(gè)準(zhǔn)重復(fù)結(jié)構(gòu)域。
12、在另一方面，本發(fā)明涉及一種組合物，其包含本文所述的分離的多肽、分離的多核苷酸、載體和/或蛋白質(zhì)聚合物，以及載體、稀釋劑或賦形劑。
13、在另一方面，本發(fā)明涉及一種制備選自seq?id?no：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、50和52的分離的fun多肽或其部分的方法，該方法包括在分離的宿主細(xì)胞中異源表達(dá)fun多肽，并任選地純化fun多肽。
14、在另一方面，本發(fā)明涉及一種制備包含選自seq?id?no：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、50和52的fun多肽或其部分的蛋白質(zhì)聚合物的方法，該方法包括在導(dǎo)致fun多肽或其部分表達(dá)的條件下，在分離的宿主細(xì)胞中異源表達(dá)fun多肽或其部分，并任選地純化蛋白質(zhì)聚合物。
15、在另一方面，本發(fā)明涉及一種通過(guò)本文所述的方法制備的本文所述的多肽。
16、如上討論的本發(fā)明不同方面的各種實(shí)施方案也在以下本發(fā)明的詳細(xì)描述中闡述，但本發(fā)明不限于此。
17、本發(fā)明的其它方面可從以下僅通過(guò)實(shí)例并參考附圖給出的描述中變得顯而易見(jiàn)。
1.一種分離的多核苷酸，其編碼與seq?id?no：50、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22和52具有至少70％氨基酸序列同一性的分離的多肽。
2.一種分離的多核苷酸，其與49、1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21和51具有至少70％、優(yōu)選至少80％、優(yōu)選至少90％、優(yōu)選至少95％、優(yōu)選99％核酸序列同一性。
3.一種分離的多肽，其與seq?id?no：50、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22和52具有70％、優(yōu)選至少80％、優(yōu)選至少90％、優(yōu)選至少95％、優(yōu)選99％氨基酸序列同一性。
4.一種蛋白質(zhì)聚合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的多肽的至少一部分。
5.一種載體，其包含根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的分離的多核苷酸。
6.一種載體，其包含編碼根據(jù)權(quán)利要求3所述的分離的多肽或根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白質(zhì)聚合物的分離的多核苷酸。
7.一種分離的宿主細(xì)胞，其包含根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的分離的多核苷酸、根據(jù)權(quán)利要求3所述的分離的多肽、根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白質(zhì)聚合物，和/或根據(jù)權(quán)利要求5或權(quán)利要求6所述的載體。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的分離的宿主細(xì)胞，其是細(xì)菌宿主細(xì)胞，優(yōu)選大腸桿菌。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的分離的宿主細(xì)胞，其是真菌宿主細(xì)胞，優(yōu)選畢赤酵母屬或曲霉屬細(xì)胞，優(yōu)選黑曲霉。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的分離的宿主細(xì)胞，其是昆蟲(chóng)細(xì)胞，優(yōu)選sf/9細(xì)胞或high?five細(xì)胞。
11.一種組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的分離的多核苷酸、根據(jù)權(quán)利要求3所述的分離的多肽、根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白質(zhì)聚合物，和/或根據(jù)權(quán)利要求5或權(quán)利要求6所述的載體，和/或根據(jù)權(quán)利要求7、8、9或10所述的分離的宿主細(xì)胞。
12.一種制備至少一種fun多肽或其部分的方法，所述方法包括在根據(jù)權(quán)利要求7、8、9或10所述的分離的宿主細(xì)胞中異源表達(dá)根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的fun多核苷酸或者根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的載體。
13.一種制備包含至少一種多肽或其部分的至少一種蛋白質(zhì)聚合物的方法，所述方法包括在根據(jù)權(quán)利要求7、8、9或10所述的分離的宿主細(xì)胞中異源表達(dá)根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的fun多核苷酸或者根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的載體。
14.根據(jù)權(quán)利要求3所述的fun多肽或其部分或根據(jù)權(quán)利要求11所述的組合物用于涂覆制品的用途。
15.根據(jù)權(quán)利要求3所述的fun多肽或其部分或根據(jù)權(quán)利要求11所述的組合物在制品上制備薄膜的用途。
16.根據(jù)權(quán)利要求14或15所述的用途，其中所述制品選自紡織品或其組件或部分以及生物醫(yī)學(xué)設(shè)備或其組件或部分。
17.根據(jù)權(quán)利要求14或15所述的用途，其中所述制品或其組件或部分是合成纖維。
18.根據(jù)權(quán)利要求14至17中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述其組件或部分是合成聚合物。
19.根據(jù)權(quán)利要求17或權(quán)利要求18所述的用途，其中所述合成纖維或合成聚合物選自聚酯、斯潘德克斯彈性纖維、人造絲、尼龍、丙烯酸類樹(shù)脂、微纖維、氯丁橡膠、聚酰胺、乙酸酯、聚氯乙烯(pvc)和合成或“人造”皮革或毛皮纖維和聚合物，優(yōu)選尼龍。
20.根據(jù)權(quán)利要求14或15所述的用途，其中所述制品或其組件或部分是天然纖維。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的用途，其中所述天然纖維選自棉、羊毛、絲、椰殼纖維、羊駝毛、亞麻、竹子、劍麻和黃麻，優(yōu)選絲。
22.根據(jù)權(quán)利要求14或15所述的用途，其中所述制品是紡織品，優(yōu)選天然紡織品或合成紡織品。
23.根據(jù)權(quán)利要求14或15所述的用途，其中所述制品或其組件或部分是生物醫(yī)學(xué)設(shè)備或包含在生物醫(yī)學(xué)設(shè)備中或其上。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的用途，其中所述生物醫(yī)學(xué)設(shè)備是可植入生物醫(yī)學(xué)設(shè)備。
25.根據(jù)權(quán)利要求23所述的用途，其中所述可植入生物醫(yī)學(xué)設(shè)備選自心血管設(shè)備，包括心臟除顫器、起搏器和左心室輔助設(shè)備、乳房植入物、耳蝸植入物、人工晶狀體、關(guān)節(jié)置換物，包括髖部植入物、導(dǎo)管、透析管、避孕宮內(nèi)設(shè)備、支架、縫合線、u形釘、繃帶和傷口敷料。
26.根據(jù)權(quán)利要求14或權(quán)利要求15所述的用途，其中所述制品是空氣過(guò)濾設(shè)備或其組件或部分。
27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的用途，其中所述其組件或部分是空氣過(guò)濾器。
28.根據(jù)權(quán)利要求26或27所述的用途，其中所述其組件或部分是合成或天然纖維和/或聚合物。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的用途，其中所述合成或天然纖維和/或聚合物包含在所述空氣過(guò)濾器中。