本發(fā)明涉及抗原結(jié)合蛋白，例如抗體，其結(jié)合白細(xì)胞免疫球蛋白樣受體亞家族b1(lilrb1)和lilrb2，而不結(jié)合或以顯著較低的親和力結(jié)合白細(xì)胞免疫球蛋白樣受體亞家族a(lilra)，其還可以抑制lilrb1和/或lilrb2與免疫細(xì)胞上lilrb受體的天然配體(相互作用蛋白，例如hla-g)之間的相互作用，并且抑制這種相互作用可以減少免疫細(xì)胞抑制，從而支持患有此類疾病的受試者的抗感染和抗腫瘤免疫應(yīng)答。特別地，本發(fā)明提供了使用lilrb1和/或lilrb2的抗原結(jié)合蛋白治療疾病的產(chǎn)品、組合物和方法，所述lilrb1和/或lilrb2的抗原結(jié)合蛋白尤其是優(yōu)選特異性結(jié)合lilrb1和lilrb2的抗原結(jié)合蛋白，例如進(jìn)一步不結(jié)合或以更低親和力結(jié)合一種或多種lilra受體蛋白(例如lilra1和/或lilra3)的抗原結(jié)合蛋白。還提供了使用lilrb1和/或lilrb2抗原結(jié)合蛋白(如結(jié)合lilrb1和/或lilrb2的抗體)降低參與細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的細(xì)胞的免疫抑制的方法，和/或治療感染性和/或增殖性疾病的方法，以及某些相關(guān)方面，包括檢測(cè)、診斷和篩選方法。

背景技術(shù)：

1、在癌癥的治療中，有許多治療方法可以消除腫瘤細(xì)胞，包括直接或間接涉及或利用免疫系統(tǒng)的一種或多種組分的方法。與這種療法相關(guān)的局限性之一是癌細(xì)胞常常利用免疫檢查點(diǎn)來(lái)逃避患者的免疫系統(tǒng)，例如通過(guò)阻止免疫識(shí)別或下調(diào)腫瘤特異性細(xì)胞毒性t細(xì)胞(ctl)反應(yīng)，從而產(chǎn)生對(duì)免疫應(yīng)答的抗性(rabinovich等，2007,annu?rev?immunol?25:267；zitvogel等，2006,nat?rev?immunol?6:715)。在正常情況下，這種免疫調(diào)節(jié)檢查點(diǎn)對(duì)于維持生理?xiàng)l件下的自身耐受至關(guān)重要，但越來(lái)越多的人認(rèn)識(shí)到它們?cè)诎┌Y中也可以發(fā)揮重要作用(hanahan和weinberg，2011,cell；144:646)；癌細(xì)胞可以接管這些機(jī)制以逃避和抑制免疫系統(tǒng)，以便發(fā)展成腫瘤(drake等，2006，adv?immunol，90:51)。

2、癌癥治療技術(shù)的當(dāng)前狀態(tài)包括阻斷目前已知的少數(shù)免疫調(diào)節(jié)檢查點(diǎn)，其作用機(jī)制已被知曉。例如，針對(duì)表面表達(dá)的免疫調(diào)節(jié)蛋白如ctla4和pd-l1的阻斷性抗體(chambers等，2001，annu?rev?immunol?19:565；blank等，2004，cancer?res?64:1140)，可以增強(qiáng)抗腫瘤免疫力，并已在多種癌癥類型中顯示出臨床成功(page等，2014，annu?rev?med?65:185)。然而，很大比例的癌癥患者對(duì)這種檢查點(diǎn)阻斷療法沒有反應(yīng)(bu等，2016，trends?mol?med22:448；hugo等，2016，cell，165:35；topalian等，2012，new?engl?j?med，366:2443)，表明其它免疫檢查點(diǎn)通路可能是活躍的。事實(shí)上，若干免疫調(diào)節(jié)途徑之間的協(xié)同合作維持了對(duì)腫瘤的免疫耐受性，這可能解釋了為什么僅阻斷一個(gè)免疫調(diào)節(jié)檢查點(diǎn)節(jié)點(diǎn)仍可導(dǎo)致腫瘤逃逸(woo等，2012，cancer?res?72:917；berrien-elliott等，2013，cancer?res，73:605)。然而，對(duì)于這些免疫調(diào)節(jié)通路作用機(jī)制的核心分子因素，人們所知甚少。實(shí)際上，成功的癌癥免疫療法需要系統(tǒng)地解析腫瘤所表達(dá)的整個(gè)免疫調(diào)節(jié)回路——即“免疫調(diào)節(jié)組”。因此，目前仍然需要鑒定更多可作為免疫調(diào)節(jié)檢查點(diǎn)的分子靶標(biāo)，特別是需要調(diào)節(jié)、檢測(cè)和利用這些可能的檢查點(diǎn)靶標(biāo)的手段和方法，例如在醫(yī)藥、診斷和研究中。

3、人類白細(xì)胞免疫球蛋白樣受體(lilr)，也稱為免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄物(ilt)家族，屬于配對(duì)受體超家族，其根據(jù)它們胞質(zhì)尾區(qū)中存在基于酪氨酸的信號(hào)基序與否，具有傳遞刺激或抑制信號(hào)的潛力。人類lilr由六種刺激性受體(lilra1-6)和五種抑制性受體(lilrbl-5)組成。lilr主要在髓系細(xì)胞和淋巴系細(xì)胞以及一些非免疫細(xì)胞上表達(dá)，并且表達(dá)模式因受體而異。多態(tài)性和拷貝數(shù)變異造成人體內(nèi)的多樣性。受體結(jié)合導(dǎo)致受體(lilrb)內(nèi)或相關(guān)銜接分子(lilra)上的基于酪氨酸的基序發(fā)生細(xì)胞內(nèi)磷酸化。下游信號(hào)事件可以由磷酸酶介導(dǎo)，如shp1、shp2和ship。一般而言，lilr活性可導(dǎo)致先天性和適應(yīng)性免疫功能的上調(diào)或下調(diào)，對(duì)不同細(xì)胞類型產(chǎn)生一系列影響。某些lilr還在神經(jīng)元活動(dòng)和破骨細(xì)胞發(fā)育中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。

4、lilrb1廣泛表達(dá)于髓系細(xì)胞、b細(xì)胞、t細(xì)胞亞群和自然殺傷(nk)細(xì)胞。lilrb2-5更多地局限于髓系細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞(dc)。lilrb的一些配體和信號(hào)通路已經(jīng)被確定。lilrb1和lilrb2是最具特征性的受體，二者既與經(jīng)典mhc?i類分子(hla-a、hla-b和hla-c)及非經(jīng)典mhc?i類分子(hla-e、hla-f、hla-g和hla-h)或hlai類分子結(jié)合，也與血管生成素樣蛋白家族成員結(jié)合。因?yàn)閘ilrb的免疫抑制功能類似于經(jīng)典的免疫檢查點(diǎn)蛋白ctla-4和pd-1，所以lilrb和配體之間的相互作用被認(rèn)為可作為免疫檢查點(diǎn)。例如，癌細(xì)胞上hla-g與lilrb1和lilrb2結(jié)合抑制了免疫細(xì)胞的激活，并產(chǎn)生了調(diào)節(jié)性t細(xì)胞(treg)和抑制性抗原呈遞細(xì)胞(apc)，這可以間接支持腫瘤的發(fā)展。此外，癌細(xì)胞上p2-微球蛋白(p2m)相關(guān)的i類mhc與巨噬細(xì)胞上的lilrb2的相互作用導(dǎo)致免疫監(jiān)視的喪失。lilrb2和配體之間的相互作用是否也起到吞噬檢查點(diǎn)的作用尚不清楚。lilrb也可能是誘導(dǎo)移植耐受以防止同種異體移植排斥的靶標(biāo)。lilrb(尤其是lilrb2和lilrb4)對(duì)于誘導(dǎo)apc的耐受表型和啟動(dòng)導(dǎo)致免疫耐受的t細(xì)胞抑制級(jí)聯(lián)反應(yīng)是至關(guān)重要的。lilrb1和lilrb2還可以通過(guò)與hla-g結(jié)合來(lái)介導(dǎo)移植物耐受。除了免疫細(xì)胞外，lilrb還由癌細(xì)胞表達(dá)，并可能支持惡性轉(zhuǎn)化和復(fù)發(fā)，以及癌癥干細(xì)胞的活性。總之，這些發(fā)現(xiàn)揭示了lilrb作為免疫檢查點(diǎn)分子和腫瘤維持因子的雙重作用。開發(fā)可用于調(diào)節(jié)lilrb的信號(hào)傳導(dǎo)的藥劑可能對(duì)涉及免疫系統(tǒng)失調(diào)的疾病(包括癌癥、炎癥性疾病和自身免疫性疾病以及移植排斥)非常有益。

5、因此，從上述一個(gè)或多個(gè)觀點(diǎn)來(lái)看，需要新的方法來(lái)降低lilrb受體的免疫抑制功能，同時(shí)避免免疫刺激性lilra受體對(duì)參與防御某些疾病(如感染或腫瘤)的免疫細(xì)胞的任何抑制作用。本發(fā)明特別尋求提供涉及新化合物的新治療途徑和方法；例如，降低lilrb受體的免疫抑制功能而不抑制任何lilra受體的免疫刺激功能的化合物和abp。此外，本發(fā)明尋求提供基于lilrb表達(dá)的診斷、預(yù)測(cè)和/或監(jiān)測(cè)免疫細(xì)胞的新策略。因此，本發(fā)明的目的是提供替代的、改進(jìn)的、更簡(jiǎn)單的、更便宜的和/或一體化的解決一個(gè)或多個(gè)這些問(wèn)題或其它問(wèn)題的手段或方法。本發(fā)明的這種目的通過(guò)在本文中任何地方公開或定義的主題來(lái)解決，例如通過(guò)列舉的實(shí)施例和/或所附權(quán)利要求的主題來(lái)解決。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明基于出乎意料的發(fā)現(xiàn)，即本發(fā)明的某些抗原結(jié)合蛋白，如抗體，選擇性地和特異性地結(jié)合lilrb1和lilrb2，而不結(jié)合任何lilra受體，或以相對(duì)更低的選擇性和更低的特異性結(jié)合任何lilra受體。在本發(fā)明的某些優(yōu)選方面，本發(fā)明的抗體相對(duì)于它們的靶標(biāo)lilrb1和lilrb2保持交叉特異性，而與脫靶蛋白lilra1和lilra3的結(jié)合顯著更少。僅對(duì)lilrb靶標(biāo)蛋白保持交叉特異性結(jié)合，而不會(huì)與lilra產(chǎn)生脫靶結(jié)合是本發(fā)明抗體的多個(gè)出乎意料的特征之一。

2、因此，一般而言，通過(guò)簡(jiǎn)要描述，本發(fā)明的主要方面可以描述如下：

3、在第一方面，本發(fā)明涉及抗原結(jié)合蛋白(abp),其特異性結(jié)合lilrb1和/或lilrb2蛋白(例如結(jié)合至lilrb1和/或lilrb2蛋白的胞外結(jié)構(gòu)域(ecd)),并且任選地，其中abp能夠抑制lilrb1和/或lilrb2蛋白或其變體的配體與lilrb1和/或lilrb2蛋白或其變體的結(jié)合。優(yōu)選地，abp不與白細(xì)胞免疫球蛋白樣受體亞家族a(lilra)型蛋白特異性結(jié)合，或結(jié)合顯著更少。

4、在第二方面，本發(fā)明涉及與第一方面的abp競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合lilrb1和/或lilrb2蛋白(例如結(jié)合至lilrb1和/或lilrb2蛋白的ecd)的abp。在相關(guān)方面，本發(fā)明涉及與第一方面的abp結(jié)合至相同表位的abp。

5、在另一方面，本發(fā)明涉及本發(fā)明abp的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(abd)。

6、在第三方面，本發(fā)明涉及編碼本發(fā)明abp或abd或其組分的核酸，并且在相關(guān)方面，本發(fā)明涉及包括這種核酸的核酸構(gòu)建體(nac),并且涉及包括本發(fā)明的核酸或nac的宿主細(xì)胞。

7、在第四方面，本發(fā)明涉及一種藥物組合物，其包括本發(fā)明的abp、abd、核酸、nac或宿主細(xì)胞，或包括作為白細(xì)胞免疫球蛋白樣受體亞家族b1(lilrb1)和/或lilrb2型蛋白的表達(dá)、功能、活性和/或穩(wěn)定性的調(diào)節(jié)劑的化合物，以及藥學(xué)上可接受的載體、穩(wěn)定劑和/或賦形劑。

8、在第五方面，本發(fā)明涉及通過(guò)向受試者施用產(chǎn)品來(lái)治療受試者的某些疾病、障礙或病癥的方法，其中所述產(chǎn)品選自本發(fā)明的abp、abd、核酸、nac和宿主細(xì)胞，或者是作為lilrb1和/或lilrb2的表達(dá)、功能、活性和/或穩(wěn)定性調(diào)節(jié)劑的化合物。在相關(guān)方面，本發(fā)明涉及用于藥物的產(chǎn)品，并且涉及用于制造藥物的產(chǎn)品的用途，其中所述產(chǎn)品選自本發(fā)明的abp、abd、核酸、nac或宿主細(xì)胞，或者是調(diào)節(jié)lilrb1和/或lilrb2的表達(dá)、功能、活性和/或穩(wěn)定性的化合物。

9、在其它方面，本發(fā)明還涉及制備本發(fā)明的重組細(xì)胞系或abp的各種方法，能夠制備的本發(fā)明的abp的雜交瘤或宿主細(xì)胞，以及涉及各種測(cè)定方法和/或診斷方法或用途，和用于這種測(cè)定方法和/或診斷方法的試劑盒，以及用于鑒定和/或表征化合物的各種方法，例如適用于藥物用途的那些。